Методы определения антибиотикочувствительности

Современная клиническая практика использует два основных принципа, на основании которых производится назначение антибактериальных средств – эмпирический и этиотропный.

  1. Проведение анализовЭмпирический (данные получены путем наблюдения или опыта) принцип основывается на накопленных знаниях о сущности и чувствительности бактерий, закономерности их роста, а также резистентности (сопротивляемости, выживаемости) микроорганизмов.
  2. Этиотропный. При этиотропном принципе первоначально предполагается выявить флору, которая является возбудителем инфекции, а затем определить чувствительность бактерии к определенным антибиотикам.

Определение чувствительности флоры

Бактерии, которые выделяются у больных, подлежат проверке на чувствительность к антибактериальным препаратам.

Использование микроскопаПри этом появляется возможность более рационального проведения терапии антибиотиками. Существуют две основные группы, на которые делятся методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам:

  • Диффузионные методы;
  • Методы разведения.

Также существуют ускоренные методы, позволяющие сократить время на определение чувствительности.

к оглавлению ↑

Диско-диффузионный метод

Диффузионный метод дисков, которые насыщаются антибиотиками, получил широкое распространение из-за простоты. При этом способе определение чувствительности осуществляется следующим образом:

  1. Чашка Петри (лабораторный сосуд, имеющий форму плоского цилиндра) частично заполняется питательным веществом – мясопептонным агаром.

    Чашка ПетриПоверх него наносится (засевается) суспензия бактерий, имеющая определенную плотность.

  2. Затем в чашку помещаются картонные диски, пропитанные некоторым количеством антибиотика, которое указывается на этикетке. Антибиотик, проникая в агар, формирует зону вокруг дисков, где рост микроорганизмов подавляется.
  3. Чашка Петри помещается в термостат, в котором поддерживается температура 37 °C. Флору инкубируют 18 часов.

    Результат определяется измерением в миллиметрах диаметра той зоны, которая возникла вокруг диска.

При выполнении анализа на чувствительность к антибиотикам немаловажную помощь оказывает Е-тест.

Это исследование выполняется так же, как и диско-диффузионный способ тестирования. При этом вместо диска используется тест в виде полоски, на которую антибиотик наносится с увеличением концентрации в соответствии с градуировкой от минимума к максимуму.

Тестовая полоскаЗона, в которой рост бактерий подавляется, имеет эллипсовидную форму. Место, где происходит соприкосновение этой зоны и полоски, определяется как МПК. Расшифровка аббревиатуры – минимальная подавляющая концентрации, которая считывается количественно согласно цифрам градуировки.

Диффузионные методы просты и доступны для выполнения практически в любой лаборатории. В связи с тем, что тест по цене довольно дорог, на практике большее распространение получил метод дисков.

к оглавлению ↑

Метод разведения

В основе методов разведения лежит алгоритм двойных последовательных разведений. В этом способе каждая последующая концентрация антибиотика в два раза ниже предыдущей. Данные разведения вносятся в бульон или агар, являющиеся питательной средой. Поверх засевают флору.

Проведение исследованияПосле выдерживания в термостате и окончания инкубационного периода (18-20 часов) производится определение полученных результатов, выраженных в единицах измерения мкг/мл, в которых измеряется МПК.

Заметный рост микроорганизмов проявляется в виде помутнения питательной среды. Это свидетельствует о недостаточности концентрации антибиотика. МПК – это наименьшее содержание антибиотика в сосуде, при котором зримо не определяется помутнение, свидетельствующее о жизнедеятельности бактерий.

к оглавлению ↑

Ускоренные методы

Наименьший промежуток времени, через который может быть получен результат исследования на чувствительность бактерий по вышеописанным методам – около 18 часов. Однако при тяжелом протекании инфекционного заболевания – это длительный период.

В экстренных случаях лечение начинается еще до получения лабораторных результатов. В связи с этим ускоренные методы имеют явно выраженный практический интерес.

В их основе лежат следующие принципы исследования:

  1. Подавление антибиотиком ферментативной (регулируемой как ускорителями, так и замедлителями) активности микробов. При этом тесте индикатор изменяет свой окрас в зависимости от того, в какой степени чувствительна флора, культивированная на глюкозе. При добавлении дрожжевого экстракта к среде время получения результата – около 2,5 часов.
  2. Проведение исследованияИзменение в количественном выражении окислительно-восстановительного потенциала (Eh) при культивировании микроорганизмов в питательной для них среде. При этом тесте добавляемые в среду специальные индикаторы изменяют свой цвет. Метод прост в техническом исполнении. Результаты исследования могут быть получены уже через два часа.
  3. Обнаружение методом фазово-контрастной микроскопии образовавшихся инволюционных (находящихся в обратном развитии) форм микроорганизмов. При этом фиксируется концентрация антибиотика, вызвавшая такое изменение.
к оглавлению ↑

Необходимость назначения теста

Воздействие антибактериальных препаратов вызывает приостановку развития микроорганизмов или может привести к их гибели.

Отдельный вид микробов может оказаться чувствителен только к определенным препаратам, которые имеют свой спектр действия. Для их выявления возникает необходимость в назначении теста.

Однако в связи с существенным изменением экологии и производством целого ряда новых антибактериальных препаратов, происходит процесс мутации (преобразования генотипа) бактерий.

Синегнойная палочкаНапример, синегнойная палочка размножается даже в таком антисептике, как раствор фурацилина. Она является распространенным возбудителем внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций и обнаруживается при гнойных ранах, абсцессах, инфекциях мочеполовой системы. Синегнойная палочка – причина четверти случаев выявления первичных бактериемий (наличие в крови бактерий). При этом данный организм может формировать чувство кворума благодаря имеющимся сигнальным молекулам, что дает возможность образовать защитную биопленку от вредных для нее веществ.

Синегнойная палочка размножается при повышенной влажности и наличии кислорода.

Является условно-патогенным видом бактерий. Это означает, что данная бактерия постоянно присутствует в организме человека. Ее патологическое размножение происходит при появлении определенных условий. Синегнойная инфекция является опасным заболеванием, которое носит остро выраженную форму. Одну треть инфекций, выявляемых при исследовании анализа мочи вызывает данная палочка.

УреплазмаЕще одним представителем специфических микроорганизмов является уреаплазма, которая становится причиной уреаплазмоза. Эти бактерии обитают в мочевых путях людей и относятся к условно-патогенным. Могут вызывать некоторый ряд заболеваний, однако обнаруживаются и у здорового человека.

Уреаплазма передается путем половых контактов или от матери к ребенку при родах. Заражение в быту имеет малую вероятность. Лечение уреаплазмоза необходимо обязательно, так как вызывающий заболевание организм – внутриклеточный паразит, из-за которого происходит нарушение процесса дробления клетки.

Выявление таких бактерий, как синегнойная палочка и уреаплазма, необходимо для определения окончательного диагноза заболевания.

Посев на чувствительность к антибиотикам выполняется для определения необходимых антибактериальных средств и их доз.

к оглавлению ↑

Выполнение анализа

Из всех существующих методов, с помощью которых выполняется диагностика инфекционных заболеваний, бактериологический посев на флору является наиболее точным.

При этом лабораторном исследовании определяется не только сам возбудитель, но и его количество, а также чувствительность. Метод определяет как патогенную, так и условно-патогенную микрофлору.

Материалом для исследования может являться:

  • моча;
  • кровь;
  • Диурезмокрота;
  • материнское грудное молоко;
  • сперма;
  • жидкость из плевры (оболочки легких);
  • смыв из бронхов;
  • желчь;
  • спинномозговая жидкость, специально полученная для диагностики;
  • воспалительная жидкость – экссудат;
  • мазок.

Мазок – это образец любой ткани или материала, являющегося производным от жизнедеятельности человека, который наносится на предметное стекло для дальнейшего изучения под микроскопом. Срок выполнения может составлять максимально две недели, что зависит от типа определяемого микроорганизма.

Мазок при исследовании урогенитального тракта женщины позволяет выявить воспаления слизистых уретры, влагалища или цервикального канала.

Боль в животеПри этом появляется возможность диагностики следующих заболеваний:

  • молочница (кандидоз);
  • гонорея;
  • трихомониаз;
  • вагиноз бактериальный.

Мазок также может быть взят из: носоглотки, зева (отверстия, проходящего в глотку изо рта), или конъюнктивы.

Мазок из зеваТакой анализ, как мазок из зева выполняется для определения доминирующих бактерий в данной области. Среди болезнетворных организмов, населяющих зев, можно выявить золотистые стафилококки, провоцирующие появление чирей на коже. При возникновении ангины, сопровождающейся осложнениями на внутренние органы, может проявиться наличие стрептококков. Это значит, что опять необходим мазок из зева.

При заборе анализа стерильной ватной палочкой пациенту требуется широко открыть рот и откинуть назад голову. Мазок из зева – это безболезненная процедура, требующая, однако выполнения предварительных рекомендаций.

За несколько дней до сдачи анализа необходимо прекратить пользоваться ополаскивателями и спреями для освежения полости рта или лечения горла, а также мазями для носа. В день забора анализа из зева чистка зубов не рекомендуется.

к оглавлению ↑

Анализ мочи

Исследование мочи позволяет выявить бактерии, такие, например, как синегнойная палочка, являющиеся причиной воспалительного процесса мочевыводящих путей, а также определить их концентрацию. Выявление патогенных бактерий считается положительным результатом. Количество бактерий в биоматериале подсчитывается в КОЕ – колониеобразующих единицах. Оно выражается, к примеру, таким числом – десять в шестой степени.

Прием таблетокПри положительном результате исследования подбирается эффективный антибиотик. При этом следует помнить, что перед введением препарата пациенту требуется предварительная проба на чувствительность к антибиотикам. Определение чувствительности бактерий к антибактериальному препарату выполняется диско-диффузионным методом.

Для исследования пригодна средняя порция утренней мочи. Ее количество, достаточное для анализа, – 3-5 мл. Она собирается в одноразовый контейнер из пластика, который заранее выдается в лаборатории. Перед сдачей анализа мочи необходимо обработать гениталии. Применение антисептических средств при этом не рекомендуется.

Сдавать анализ мочи не рекомендуется при прохождении антибактериальной терапии. Это является возможным только по истечении двух недель после окончания курса лечения. Собранный анализ нельзя хранить дома, так как в тепле происходит размножение появившихся бактерий, например синегнойной палочки, уже через несколько часов.

Якутина Светлана
Якутина Светлана
Эксперт проекта OAntibiotikah.ru
Статья помогла вам?
Дайте нам об этом знать - поставьте оценку
1 Star2 Stars3 Stars4 Stars5 Stars (No Ratings Yet)
Загрузка...

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *